核酸試劑采購介紹

?

PCR試劑簡單的理解就是用于做PCR的試劑。

?

試劑中不應該存在對PCR反應有影響的雜質。

?

像核酸、核酸酶，如果是水的話，鹽離子盡可能的小，最好是超純水。

?

像一些鹽類，分析純的可以達到要求。

?

PCR試劑的分類

?

1、提取試劑：包括了各種提取DNA的常用試劑,和純化DNA所用的試劑；

?

2、PCR擴增試劑：主要是taq酶，dntp，緩沖試劑，引物；

?

3、產物檢測試劑：瓊脂糖、聚丙烯酰胺凝膠、aps、tmed、eb等等。

?

PCR試劑的原理

?

PCR的原理是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結合，再調溫度至DNA聚合酶最適反應溫度，DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖的方向合成互補鏈。

?

PCR最有價值的應用領域就是對感染疾病的診斷。理論上，只要樣本有一個病原體存在，PCR就可以檢測到。

?

PCR試劑注意事項

?

1、PCR實驗一定要保管好試劑，防止交叉污染，尤其是交叉使用，極易引起污染。

?

2、NA處理最好用硅烷化塑料管以防粘附在管壁上，所有緩沖液吸頭、離心管等用前必須高壓處理，常規消耗用品用后作一次性處理，避免反復使用造成污染。

?

3、超凈臺內設內供PCR用微量離心機、一次性手套、整套移液器和其它必須品，移液品用一次性吸頭和活塞的正向排液器，防止移液器基部污染。

?

4、PCR操作應戴手套并勤于更換。

?

5、成套試劑，小量分裝，專—保存，防止它用。配制試劑用新器具，用后作一次性處理。

?

6、試劑管用前先瞬時離心，使液體沉于管底，減少污染手套與加樣器機會。

?

7、引物稀釋時，要首先瞬時離心，以避免粉末狀引物在開蓋時彈出管外。

?

PCR試劑的操作流程

?

1、試劑準備階段：

?

試劑準備是PCR操作的第一個流程，需要在試劑貯存和準備區的超凈工作臺或生物安全柜進行，用確保無污染的移液器、槍頭及容器等進行分裝。

?

所有的PCR體系都應該在-20C保存，除了ddH 20之外，其余的試劑組份需完全融化之后再加入，以免影響濃度。

?

配制反應體系應在快速進行，以減少非特異性擴增。

?

體系配制完成之后應馬上進行PCR反應。

?

2、樣本制備階段：

?

樣本制備是整個PCR反應中最為關鍵的環節，在接收樣本時一定要確保樣本的密封性以及樣本編號的唯一性。

?

嚴格遵守操作規程進行加樣操作，操作時候盡量少說話或者不說話。

?

所有操作需要在生物安全柜內進行，操作前后生物安全柜需要進行紫外燈消毒，注意生物安全柜中物品的排放。

?

3、核酸擴增：

?

在核酸擴增環節需要選擇質量好的EP管，裝入反應體系的EP管上機前混勻、離心，將管壁及管蓋上的液體甩至管底部。

?

在樣本檢測的同時設立對照。

?

同時嚴密檢測PCR擴增儀的各項性能指標，其中對PCR擴增儀而言溫度控制就意味著質量。

?

如何選購PCR試劑

?

一般試劑盒主要是針對酶分類，其次是分為簡易操作混合體系和分開單獨體系。

?

先說酶，你的基因如果是小于2K，那么普通的高保真酶就可以滿足。

?

如果是長片段就選擇各公司針對長片段設計的酶。如果不需要對序列保真度要求很高，只需要鑒定一下，那么普通的taq酶就夠了。

?

針對體系問題，如果你的基因有文獻參考成熟的體系，那么一般就定混合體系那種premix的就可以，如果對Mg離子等有特殊要求，就選擇分開自己配體系那種。